从猪十二指肠中制取胰酶分泌素

原料采集及处理  猪宰杀后立即取小肠上段1m处，放入冷水，去脂肪及内容物，沸水煮7～8min，破坏酶及惰性蛋白质冷却送冰库。

    提取及吸附  取冷冻小肠磨碎（按7kg计算）加0.5mol/L冰醋酸20L，室温搅拌提取20h，过滤加经预处理的海藻酸200g，10℃以下搅拌吸附24h，至溶液无明显的三氯醋酸沉淀反应，静止分离上清液，取下层海藻酸抽滤。

    洗涤及洗脱  将海藻酸吸附物先后用4l 0.005mol/L盐酸及少量丙酮洗涤，再用适量0.025mol/L盐酸洗涤，抽干，然后用1.5l0.2mol/L盐酸搅拌洗脱1～1.5h，抽滤，取滤液，海藻酸待处理后再使用。

    盐析  量取洗脱液，慢慢加入28%（W/V)氯化钠，边加边搅拌至饱和，置冰箱有雪花状沉淀生成，冷库离心（4000×g，10min）收集沉淀物。

    纯化  除杂蛋白质，取离心沉淀物，加5倍量90%乙醇，搅拌4h，离心，倾出上清液，沉淀物再加3倍量90%乙醇，操作同前，合并乙醇溶液，沉淀弃之。离心液用氢氧化钠-乙醇液调节pH5.4，置冰箱内，离心除沉淀，离心液再调节pH7.5，同前操作，收集离心液。

    丙酮沉淀  澄清离心液用盐酸调节pH3.0，加入5倍量（v/v）丙酮，离心取沉淀物，用少量丙酮、无水乙醚洗、五氧化二磷真空干燥，得白色GIH粉末。

    分离  甲醇处理  取上述干粉4g，加入甲醇200ml，搅拌2～4h，离心，不溶物再加甲醇30ml搅拌2h，离心、合并二次离心液，同上法先后分别调节pH至5.2及7.5，二次沉淀，上清液调节pH至6左右，加入3倍量（v/v）无水乙醚，离心收集沉淀，以少量无水乙醚洗涤，五氧化二磷真空干燥，得白色粉末MS（促胰液素）。

    甲醇不溶物以少量无水乙醚洗涤，挥发乙醚，按1：50（W/V）加入25%乙醇搅拌，使其充分溶解，离心，分取上清液，加入2倍体积的正丁醇，溶液呈浑浊，放入冰箱6～5h，冷冻离心（34000×g，10min），聚沉淀物依次用丙酮、乙醚、无水乙醚洗涤，五氧化二磷真空干燥，得甲醇不溶物NMS（胆囊收缩素-促胰酶素）。

    上述MS及NMS经柱层析分离，洗脱液用751型分光光度计测蛋白浓度。

    CMC柱层析  以0.005mol/L氢氧化钠和0.5mol/L盐酸常温预处理，用0.02mol/L碳酸氨缓冲液，充分平衡后装柱。

    强碱型阳离子交换柱QAE-Sephadex A-25(40～120μm)，用蒸馏水浸饱溶胀后再用0.5mol/L氢氧化钠和甲酸处理，最后用0.1mol/L甲酸铵（pH9.0±0.1)平衡装柱。

    用CMC柱分离精制MS制备促胰液素。用QAE-Sephadex A-25柱精制NMS制备胆囊收缩素。