非肽含氮类化合物

非肽含氮类活性成分多为蛋白质代谢的次生产物，因此于动物中分布较广，种类也多，多数有类似生物碱性质。70年代初虽然有过关于动物生物碱的报告，但由于这类活性成分的结构种类复杂，尚难以生物碱类别加以概括，故将其汇总为非肽含氮类，兹分别按结构分类加以叙述。

这类物质大多数有较复杂的氮环结构，但直链含氮化合物也不少，其中活性强者颇多，如沙群海葵毒素等。

生理活性及应用

    胆红素在体内代谢生化方面研究颇多，但有关活性及药用方面报道较少。胆红素活性研究多伴随牛黄而被研究。

促进红细胞新生作用

    Popper(1930)给人体注射0.05g胆红素，3h后血色素量明显增加。杉本等^[142]（1940）给雄性家兔口服2～3或20～30mg/kg体重时，证实胆红素有促进红细胞新生作用。Roh等（1973）给鼠长期皮下注射胆红素（27mg/kg.d），也证明有刺激细胞生成作用。

对心血管呼吸系统的作用

    岩城^[143]（1964）报道，乌拉坦麻醉家兔静脉注射5mg/kg胆红素时，血压持续下降，同时呼吸抑制，心脏强烈抑制。而胆绿素则对心脏无影响。

解热作用

    健康豚鼠口服给予200mg/kg胆红素时，解热作用较弱。但与胆汁酸并用时解热作用显著增加。

抗病毒作用

    金恩源等（1985）报告，以不同稀释度的乙脑病毒0.1ml/只，皮下感染小白鼠24h后，开始服药，每天一次共5次，每次6mg/只胆红素，抑制指数高，表明胆红素对乙脑病毒有较好的治疗效果。冈崎^[144]报告胆绿素有增殖新细胞的作用，可用于血清肝炎、肝硬变等的治疗。

吲哚类

    吲哚与吡咯相似，遇酸发生两分子加成反应，一分子加在另一分子2，3-位的双键上，生成二吲哚。吲哚分子的吡咯核由于对苯环的共轭效应，使电子密度有所减少，但遇光和氧仍易被氧化。吲哚的酸性约与吡咯相似。吡咯与吲哚性质极为相似，均无碱性，或者极弱，易进行亲电取代，难发生亲核反应。只唯一区别吡咯取代发生在α-位，吲哚在C₃位。

脱氧核糖核蛋白的提取制备

从小牛胸腺提取DNA

    从小牛胸腺提取DNA  原料处理：将新鲜小牛胸腺浸于0.012mol/L柠檬钠和0.14mol/L氯化钠的混合液（称SC溶液）中，去脂肪、血块等，再用SC溶液反复洗涤数次至无血色为止。

  提取 取绞肉机将洗净的小牛胸腺绞碎后，加适量的SC液，用高速成捣碎机捣碎，使成匀浆，时间为1-1.5min（1000rpm)

  分离 浆匀浆在离心机中以4000rpm离心10min，弃去上清液，沉淀物再加适量SC溶液，再捣碎，反复离心几次直至沉淀物洗净为止。

  溶解 将洗净沉淀物加11900ml生理盐水（按1kg投料量计）搅匀，由搅拌机略行搅拌后，即加1700ml SDS溶液（每100ml45%乙醇中含有十二烷基磺酸钠5g），搅拌2h以上。这时溶液变得粘稠，冷库过夜。次日将溶液搅拌加入氯化钠750g，使溶液中氯化钠的浓度达到1mol浓度，这时溶液的粘稠度下降，继续搅拌，以保证氯化钠完全溶解。

  沉淀 将溶液离心4000rpm 2min，取上清液，过滤，再加入等量95%预冷乙醇，搅拌将核酸沉淀取出，挤干，用冷乙醇复洗2次。再用丙酮洗涤两次，压干。真空干燥，即得产品。

    从鱼精中提取DNA  

  分离核蛋白：取冷冻鱼白，用绞肉机绞碎，加水100kg（投料10kg计），再加氯化钠使浓度达到6%，并加柠檬酸钠，使浓度达0.1%，搅拌1～2min。加4倍水，再搅拌1～2min，有片状脱氧核蛋白浮在水面上。将脱氧核蛋白捞出。

  提取 在捞出的核蛋白中加水132kg、5%SDS溶液518kg,搅拌溶解10～20min，4000rpm离心，沉淀，将上清液过滤。

  沉淀 滤液加等量95%预冷乙醇，得白色纤维状DNA，用乙醇反复洗几次，丙酮洗2次，压干，真空干燥，即得成品，DNA酶解法制备混合脱氧核苷酸：

  酶解  将500gDNA于10000ml蒸馏水中搅拌溶解，进冷库过夜。次日将浸泡开的DNA粘稠液倒入反应锅，使体各达到50000ml，90℃加热10min，进行热变性。用盐酸调PH5.4左右，加入5000ml桔青霉发酵液（内含5＇-磷酸三酯酶，预热到70℃，pH5.4左右）于72℃左右保温1.5h进行酶解。用氨水查PH到7.0，迅速升温到90℃，加热10min以破坏5＇-磷酸二酯酶，并使蛋白变性沉淀。将酶解液冷却，放料，进冷库过夜。

  交换  将酶解液过滤或离心，除去蛋白，然后稀释约1倍，调pH8.5左右上离子交换柱。流速1～1.4ml/cm².min，流出液pH>14。

  树脂型号 717或717，OH型，树脂量4kg。

  树脂处理  碱处理用2mol/L氢氧化钠2.5倍柱体积；酸处理用2mol/L盐酸2.5倍柱体积，再碱处理同上，然后水洗到中性。

  洗脱  上样完毕后，用蒸馏水洗到流出液pH7.0左右，用0.2mol/L盐酸溶液洗脱，流速是上样流速的三分之一左右。PH在2.5时开始收集，到PH0.5为止。收集完毕，洗脱液用10mol/L氢氧化钠调PH到7.0，有大量乳白色沉淀产生，冷库过夜。

  吸附  次日将阴柱洗脱液过滤除去蛋白，滤液用盐酸调PH3.5后上碳柱，流速100-120ml/min碳量1250g，型号769活性碳。

  炭柱处理  1mol/L氢氧化钠进行碱处理，煮沸15min；1mol/L盐酸进行酸处理；煮沸15min，水洗到PH3.5，待上样。

  碳柱洗脱  上样后，用相当于炭柱体积的三倍蒸馏水洗脱，流速60ml/min，再用乙醇氨水洗脱，流速10ml/min。

  真空浓缩干燥  将液体浓缩至糖浆状，在无水乙醇中反复脱水。研成粉状真空干燥，得4种脱氧核苷酸混合成品。

  制剂  按每m125mg溶于蒸馏水，用10%氢氧化钠调节pH6.5～7.5，加0.3%活性碳，放置15min，经硅藻土层抽滤，滤液再通过纸浆过滤两次，加深0.3%抗氧剂偏重亚硫酸钠，待溶解后澄清过滤，灌注到2ml安瓿中，封口，100℃灭菌15min，得4种脱氧核苷酸钠注射液。

三磷酸腺苷

提取制备

    通常以兔肌提取法制备ATP二钠盐。兔肌提取法大多是采用汞盐沉淀工艺。近年来，改进了ATP的分离提纯方法，建立了树脂分离工艺。除用兔肌提取ATP外，尚有氧化磷酸化和光合磷酸化法制造ATP的工艺。

工艺路线：

               三氯醋酸        氢氧化钠、醋酸钡            硝酸、硝酸汞           蒸馏水，硫化氢

兔肌（背肌、腿肌）───→提取液───────→ATP钡盐─────→ATP汞盐─ ────→上清液

           氢氧化钠、氯化钠、乙醇                        丙酮，乙醚

          ────→ATP二钠盐沉淀──→成品     　　　　　　　               ^pH6.8                 pH3.8         

工艺过程：  

  兔肌采取及处理  取体重2.5kg以上的健康家兔，在尽量保持动物安静情况下迅速击昏，放血，剥皮，除去内脏，放入冰浴中，使降温至5℃立即割取