蛋白质多肽激素的提取1

激素是一类动物体内的化学信息分子。动物激素是指由动物腺体细胞和非腺体组织细胞所分泌的一切激素。蛋白质多肽激素包括由丘脑、脑垂体、胰腺、甲状旁腺、甲状腺、胸腺、胃肠道、肾、胎盘、睾丸、卵巢及其他非腺体组织所分泌的多种激素。

促性腺激素（Gonadotropic hormone,Gonadotropin,GTH）

    此激素可促进睾丸的精子形成、卵胞成熟及参与黄体的形成，是垂体前叶产生的糖蛋白激素。包括促滤胞激素（FSH,Follitropin）和促黄体素（LH,Lutropin）两种。LH在雄性动物称为促间质细胞素（ICSH）。绝经期妇女尿中含大量的GTH，称为尿促性腺激素（Urogonaclotropin），过去称为人绝经期促性腺激素（HMG），来源于垂体，具有FSH和LH活性。

    常用冰冻的垂体或垂体丙酮粉为原料。采用乙醇和醋酸缓冲液提取，基本可与GH、ACTH及PRL等分开。盐析是常用的纯化方法。在垂体各种蛋白质激素中，唯FSH不被50%饱和硫酸铵沉淀，可用该法与LH及其它垂体激素分开。然后再用离子交换纤维提纯，在低离子强度的溶液中，只有LH吸附在CM-纤维素柱上，FSH不吸附。相反在DEAE-纤维素柱上，FSH吸附性较LH强得多。在提纯LH过程中，不易将TSH除净。亲合层析对克服这个困难十分有效。在粗提过程中，用偏磷酸沉淀TSH对于LH的纯化效果好。提纯还可用沉淀电泳、等电点聚焦电泳、凝胶过滤、凝胶过滤、磷酸钙层析、羟基磷灰石层析以及亲合层析等方法。

    HMP可以从绝经期妇女尿中提取，可用高岭土吸附。它在PH4.0吸附力最强。但在PH11.0时可把HMP洗脱下来，然后用有机溶剂沉淀。各种动物垂体中FSH和LH的相对含量很不一样。半垂体LH含量多于FSH。马垂体则相反，FSH较较LH高几锐。猪垂体两种GTH含量大致相同。

胃肠道激素（Gastrointestinal hormone,GIH）

    胃肠道激素是最早知道其存在的激素。在“激素”词使用之前，1902年Bayliss及Starling就发现肠内存在促进胰脏分泌碳酸氢钠的激素，直到1961年才分离纯化胰泌素。由于肠道不是经典的分泌腺，含激素细胞稀疏的分布在胃肠内壁上，能水解激素的蛋白水解酶又极丰富，含量又少，不易分离纯化，加之它的临床需要不如胰岛素那样近切等，以上是对它研究的长期停滞不前的原因。

    近10余年来，由于近代分离鉴定技术迅速发展，在胃肠道激素中，已被确认的有胰泌素、胃泌素、胰酶分泌素等。其它如抑胃肽、舒管紧张肽、肠高血糖素、胃泌素抑制肽、糜蛋白酶素、十二指肠素（Duocrinin）及绒毛收缩素（Vilikinin）等，它们的化学结构及生理功能目前还正在认识中。这些胃肠道分泌素除调节胃肠道机能外，对胰腺分泌功能也有很大影响，故也有人称它们为“胃肠胰内分泌素”（Gaterenteron pancreas endocrinesystem,GPE系）。GIH为多肽类化合物。分子量2000-5000之间。

    胃肠道是体内最大而又复杂的内分泌器官，它的分泌细胞总数超过任何其它内分泌腺体并分散在胃肠道粘膜表面。已知消化系多肽激素有20余种，它们相互制约，协调地控制消化腺分泌和胃肠道蠕动，以及粘膜的更新和滋养作用。

    按已知结构有两族存在着结构相似性，因此在生理功能上有重迭交叉作用。一类是胰高血糖素、胰泌素、VIP及GIP，另一类是胃泌素与CCK。前类结构类似性平均分布在整个分子，但无边疆的较长的相同顺序。它们需要完整的分子才起作用，后一类肽的羧端5肽结构完全相同，不需要完整的分子就能发挥全部活性，如合成的5肽胃泌素及CCK-8肽Tyr硫酯均已呈现充分的生物活性。但CCK必须是硫酯形式才呈现活性，CCK-8肽也是如此，胃泌素无此严格要求。

    各类动物脑内CCK-8肽分布甚广，在大脑皮质中含量最高，并集中在神经末稍的突角囊泡。胖鼠较瘦鼠脑中CCK-8肽含量明显地减少，在两枉类分出的雨蛙皮素也与CCK的羧端顺序相同。胰兰氏岛的神经过敏末梢中有较多的CCK-4肽，它是刺激胰岛素、胰高血糖素、生长激素抑制素分泌的内在因子，作用专一，对结构的要求非常严格。

    人们认为CCK样活性肽是较古老的分子，以后才分化出胃泌素。可用电镜观察按分泌细胞胞浆颗粒密度形状和大小加以分类，并用免疫法（免疫荧光和免疫-过氧化酶标记法）已能鉴别这些分泌细胞。

    目前已确定10余种多肽类既存在于胃胰内分泌细胞，又存在于神经过敏细胞中，这些肽类称脑-肠肽（Brain-gut peptide）如胃泌素、胰泌素、胰酶分泌素、舒血管肠肽、胃动素、P皮质激素、胰岛素、胰高血糖素等。发现有些胃肠道激素在脑中也有。反之，有些神经激素或活性肽也存在于胃肠道中，见表5-5。因此有人认为胃肠道的内分泌细胞在胚胎学上和神经组织同源。   

    这些胃肠道激素的分泌，既受神经支配及食物刺激的影响，又相互促进和相互制约。如胃泌素（GIT、胃泌素释放肽（GRP）、生长抑素（SST）的释放受迷走神经和胃酸的控制两者有相互制约的作用，具有协同胃肠道的蠕动、分泌、吸收和粘膜更新等生理功能。某些激素失调就可引起疾病。例如血管活性肠肽分泌过盛就引起水泻，反之引起便泌。几种主要胃肠道激素的原发作用，可见表1

表1 几种主要胃肠道激素的原发作用

         - - -强抑