酶的提取与制备2

从蛋壳膜制取溶菌酶

工艺流程：   抽提3次                             →沉淀

       7kg蛋壳──→抽提液21000ml──→│        →沉淀──→回收聚丙烯酸

                                          →上清液18500ml→凝聚物│   →沉淀

                                                                    →上清液│

工艺过程：                                                                     →  上清液→结晶

  抽提  蛋壳膜（包括新鲜和冰冻的流清或粘壳蛋的蛋壳），用循环水冲洗后粗碎，加1.5倍量0.5%氯化钠溶液，用2mol/L盐酸调pH3.0，40℃搅拌提取45min，过滤。滤渣再加上提取2次，合并前两次滤液。第3次滤液作一批提取用。

    选择性热变性及等电点沉淀  将提取液调整至pH3.0，于沸水浴中迅℃速升温至80℃，随即搅拌冷却，再用醋酸调整pH4.6，促使卵蛋白在等电点沉淀，离心或“吊滤”。

    聚丙烯酸凝聚  加入清液体积一半量的5%聚丙烯酸（pH3.0)，搅匀后静置15min，倾去上层混浊液，得粘附于器底的溶菌酶-聚丙烯酸凝聚物。

  凝聚物解离  凝聚物悬于水中，加碳酸钠溶液调整pH至9.5，使凝聚物溶解，再加入聚丙烯酸用量二十五分之一的50%氯化钙溶液使溶菌酶解离。用2mol/L盐酸调pH6.0，离心分离上清液。沉淀可用硫酸处理后除去硫酸钙沉淀，回收聚丙烯酸。

    结晶  清液用氢氧化钠溶液调pH至9.5，离心除去氢氧化钙沉淀。上清液加入氯化钠至5%，静置结晶。粗结晶溶于pH4.6醋酸水中，分去不溶物，进行再结晶。每kg蛋壳膜可获得再结晶产品近1g。