氨基酸提取与制备

合物溶液分别通过732（H⁺型）柱，随即以0.5mol/L氨水洗脱，当流出液pH上升至7.0并显三酮反应时开始收集，直至无反应时炎止。浓缩流出液至干，以少量水溶解，加入4～5倍体积的95%乙醇，冰箱放置过夜，滤取结晶，用适量乙醇洗涤两次，60℃烘干，得L-Thr结晶0.64g及L-Ser结晶0.42g。

从纤维蛋白中提取L-色氨酸

材料：

    血纤维  新鲜猪血纤维压榨后，反复冲洗与搓擦至近白色，绞碎，冷水浸泡12h，甩干。

    酶制剂  包括3942中性蛋白酶（活力200000U/g)、1398中性蛋白酶（活力30000U/g)、166放线菌蛋白酶（活力30000U/g)、胰酶（活力1：60）及猪肾匀浆（内含亮氨酸氨基肽酶及氨酰脯氨酸二肽酶）等。

操作方法：

    取血纤维25kg，加蒸馏水37.5kg，加热至80℃以上变性30min，甩干，搓散后投入水解罐，加蒸馏水40～45l，搅拌并升温至45℃，加3972（25g)及1398（175g），甲苯与氯仿各250ml，每0.5h搅拌10min，并以氢氧化钙悬浮液调节并维持pH至7.0～7.2，48h后加酶制剂166(175g)，继续水解8h，加肾匀浆1.5kg(内含氯化锰40g)，维持pH7.5～8.0，40h后加亚硫酸氢钠110g，以12mol/L硫酸调节pH至5.0，加热至80℃保温20min，过滤，将滤液以等体积的水稀释，通过多也型阳离子交换树脂（H型）。检查流出液至有色氨酸反应时停止上柱，用水洗柱，再用0.3mol/L氢氧化铵液洗脱，收集洗脱液（每瓶3l)。至流出液pH为12且无色氨酸反应时停止洗脱。以单向纸层析检查各瓶洗脱液，将含色氨酸的合并。减压浓缩至沉淀析出，置冰箱24h以上，减压过滤，结晶分别以65%与95%冷乙醇洗涤，得色氨酸粗品。调节滤液pH至6.0，又有大量结晶析出，静置24h，过滤，结晶同上洗涤2次，合并两次色氨酸粗品，60℃真空干燥8h，再用65%乙醇重结晶2次，95%乙醇洗1次，真空干燥8h，得量55g，收率1.1%(不抱括回收)。

脑内游离氨基酸提取

    取脑组织500mg，放入冰冷的10ml75%乙醇中匀浆化，将匀浆倒入50ml圆底小烧瓶中，再将匀浆管用5ml乙醇洗涤1次，一并倒入小烧瓶内，于100℃水浴中回流提取20min。将液体倒入30min，将液体倒入15ml离心管中，4000rpm离20min，至产生泡沫后立即取出，将小三角烧放入冰箱内，冷却30min,将液体倒入15ml离心管，4000rpm离心2h。将上清液倒入50ml圆底烧瓶内，于90℃水浴中继续蒸去乙醇，将小烧瓶内淡黄色水溶液倒入25ml分液漏斗中，然后用2ml重蒸馏水洗1次，并入分液漏斗中，再用乙醚分2次洗，也并入分液漏斗中，充分振摇，洗去脂类，放置10min，将下部水相放入圆底烧瓶中，于40℃水浴上蒸去乙醚，然后移至100℃水浴上减压抽干样品。可供氨基酸自动分析仪测定。

L-组氨酸精制

水结晶法：

    原理  组氨酸和组胺类物质均易溶于水，而不溶于乙醇。故不宜用乙醇结晶，以防微量组胺类物质一起结晶起来。因组氨酸含量在98.5%以上，组胺类物质含量在百万分之几，故采用饱和溶液结晶即可将两者分离。

操作过程  称取不合格组氨酸盐432g，加800ml无离子水，于水浴上加热使之全溶。再移至冷水溶中，不断搅拌，结晶逐渐析出，温度降至室温后，真空抽滤，分离，用少量乙醇洗，烘干即得精品。

树脂分离法：

原理  组氨酸和组胺类物质都有一个咪唑基，易溶于水。组氨酸较组胺多一个羟基，故极性较大。利用组氨酸和组胺离子交换树脂和水的引力不同，从而达到分离。

操作过程  ①离子交换：将从水结晶后的母液配制成含量在5%左右的浓度，用碱调pH10.0选用717（OH）树脂500ml。离子交换柱规格φ5.5cm。上柱流速1%（V/V/min),上柱量为树脂体积的3倍，再用0.5mol/L盐酸洗涤，用量是树脂体积的3倍。收集上柱流出液和洗涤液。

②浓缩、脱色、精制：将上柱流出液和洗涤液分别浓缩到原体积的十五分之一，浓缩液分别用浓盐酸及浓氨水调pH4.0。视溶液颜色确定投碳量。于85℃搅拌脱色45min，分离，搅拌结晶，精制过程与水结晶法相同，母液可上柱回收。