氨基酸提取与制备

氨酸组分和纯谷氨酸组分，分别减压浓缩至一定体积，加适量碳脱色，过滤，滤液用水浴浓缩至结晶析出，冰箱放置，次日过滤取晶。母液继续浓缩，依法取晶。合并2次结晶，重结晶1次。结晶用75%乙醇洗涤2次，80℃干燥4～6h，得L-天门冬氨酸和L-谷氨酸精品。②甘氨酸和L-丙氨酸：除结晶用冷95%乙醇洗涤外，其他同L-谷氨酸。③L-亮氨酸和L-缬氨酸：纯亮氨酸和纯缬氨酸组分，分别薄膜浓缩至一定体积，按体积加0.5%碳脱色，将脱色液浓缩至表面呈膜，于5～10℃冷却，过滤取晶，母液继续浓缩，依法取晶，合并2次结晶，并重结晶1次，然后将结晶复溶于水，用2mol/L氨水调pH8，依上法取2次结晶，并重结晶1次，继用95%乙醇洗涤2次，60～80℃干燥4～8h，得L-亮氨酸和L-缬氨酸精品。④L-赖氨酸盐酸盐：纯赖氨酸组分经薄膜浓缩赶氨至一定体积，浓缩至稠，加适量蒸馏水溶解，再次减压浓缩至稠，如此反复至奈氏试剂检查无NH₄⁺为止。然后加适量水溶解，用6mol/L盐酸调pH3.8～4.2，加适量碳脱色，脱色液继续浓缩至稠，冷后加2～3倍量无水乙醇，搅拌析晶。结晶60～80℃干燥，得L-赖氨酸盐酸盐精品。母液回收套用。各种氨基酸的收得率见表1。

表1   各种氨基酸的平均收得率和回收率（W/W）%

氨基酸名称	收得率	回收率
L-天门冬氨酸	2.28	34.65
L-谷氨酸	1.60	20.25
甘氨酸	0.93	32.39
L-丙氨酸	0.79	25.05
L-缬氨酸	0.90	23.68
L-亮氨酸	1.92	25.26
L-赖氨酸Hcl	1.47	22.44

从猪血粉中制备氨基酸

操作方法：

    水解  取猪血粉、水、盐酸置水解缸内，按猪血粉：水：工业盐酸（1:1.3:2)配比，尽量浸泡搅匀，加热至沸，回流，112～114℃水解20h，停止加流，赶酸4h，停止加热，降温至60℃，减压过滤，滤液加4倍量水，混匀得上柱液。

    上柱  ①装柱（活性碳柱）：玻璃柱4支，直径6cm高120cm，颗粒碳用水浸24h，装柱，每支装2l，碳层厚约87cm。732^#离子交换柱为玻璃柱5支，直径6cm高120cm，每支装732^#〔H〕型树脂2l，树脂层厚约87cm。②上柱（活性碳柱）：两柱串联上柱，速度为800ml/h，至苯丙氨酸穿漏。732^#离子交换柱为4柱串联上柱，以活性碳流出液为上柱液，速度为2400ml/h，至组氨酸明显穿漏。

    水洗水解吸  ①活性碳柱：拆开两柱，各以自来水洗到pH大于5。每支水洗碳柱各串1相同碳柱，分别以1mol/L氨水解吸，速度为800ml/h，全部收集，至酪氨酸转阴。分别继续以适当浓度（如40%）乙醇解吸，速度为600ml/h，全部收集，至苯丙氨酸转阴。②732^#离子交换柱水洗：用自来水洗到pH4，洗后再串一相同的732^#〔H〕型离子交换柱，以0.05mol/L氨水解吸。速度为1600ml/h，分部收集，配合纸层析收集L-亮氨酸部分及L-组氨酸部分。L-组氨酸转阴后改用0.1mol/L氨水解吸，速度仍为1600ml/h，收集L-赖氨酸部分，洗至出现空白后改用2mol/L氨水解吸，收集L-精氨酸部分，至茚三酮反应转阴停止解吸。

    结晶  ①分别薄膜浓缩L-酪氨酸及L-苯丙氨酸洗脱液至出现大量结晶，静置，降温，过滤收集结晶，母液再行浓缩，合并两次结晶，得L-酪氨酸和L-苯丙氨酸粗品。

    ②薄膜浓缩L-亮氨酸洗脱液至出现浓厚片状结晶静置，降温，过滤收集结晶，得L-亮氨酸粗品。

    ③将L-组氨酸洗脱液反复浓缩至稠状物，赶净氨，然后加浓缩物体积5倍的水加热溶解，用6mol/L盐酸调pH3.0，加溶液体积0.5%的活性碳，80℃加热30min，过滤，滤液浓缩至大量结晶，加3倍量95%热乙醇，静置6h，过滤收集结晶，得L-盐酸组氨酸粗品。

    ④将L-赖氨酸洗脱液反复浓缩赶氨，用6mol/L盐酸调pH3.8左右，加溶液体积0.5%的活性碳，加热至80℃，过滤，滤液浓缩，加3倍量95%乙醇，搅拌，静置，得L-盐酸赖氨粗品。

    ⑤将L-精氨酸洗脱液浓缩至稠厚状，赶净氨，加适量蒸馏水，以6mol/L盐酸调至pH3.8左右，加热至80℃，加溶液体积0.5%的活性碳，保温30min，滤液减压浓缩至稠厚状，加3倍量95%热乙醇，搅拌，静置过夜，收集结晶，得L-盐酸精氨酸粗品。

    ⑥重结晶：将上述6种氨基酸粗品分别用水做溶媒重结晶得精品。

从纤维蛋白制备丝氨

工艺路线：                                                                  

纤维蛋白→水解液→加水→上柱液→Thr、Ser与酸性氨基酸→Thr与Ser混合物→铜铵铬合物─→Thr(Ser)铜铵铬合物─→Thr(Ser)

　   

操作方法：

    上柱液制备  将猪血纤维蛋白清洗至白色，绞碎，干燥存放。称取200g加10倍体积6mol/L盐酸，于120℃水解16h。滤液减压浓缩3次，加水至1l，加热至80℃以上，以2～4%活性碳脱色2次，稀释至10l(含原料蛋白2%）。

    初分  取上柱液1.9l，以1ml/min流速通过3支串联的732^#（H⁺型）树脂柱（φ2.0×40cm），上柱完毕以少量蒸馏水洗柱，再加0,15mol/L氢氧化铵洗脱，流速为0,5ml/min，待流出液pH下降至3.0～3.5并显茚三酮反应时，开始部分收集。以纸层析确定含Thr与Ser组分，合并，用氢氧化铵调pH至4.0～4.5，通过701（Ac^-型）树脂以除去酸性氨基酸，待流出液显茚三酮反应时部分收集。上柱完毕，用水充分洗柱。合并全部流出液，浓缩至小体积，加大量95%乙醇，冰箱放置过夜，过滤，以适量乙醇洗涤沉淀物，60℃烘干，得Thr与Ser混合物2.64g。

    络合物交换分离  络合物交换柱制备：以2.5%硝酸铜液通过两支串联的φ2.2×44cm724（Na⁺型）树脂型，再用1mol/L或0.3mol/L氢氧化铵依次流过，使形成铜氨络离子型树脂。Thr与Ser的分离：将Thr与Ser混合物1.5g及硝酸铜2.5g共溶于0.3mol/L氢氧化铵中，使形成铜氨络合物，并使氨基酸的总浓度为1%。将此溶液以0.5ml/min的流速通过络合物柱，上柱完毕立即用0.3mol/L氢氧化铵洗脱。当流出液显蓝色时开始收集，至浅蓝色为止。以纸层析确定仅含Thr与Ser的组分，分别保留。

精制  将Thr或Ser的铜氨络