氨基酸提取与制备

    第3根柱改用0.2mol/L氯化铵，以400ml/min(8.8cm/h)流速，分离缬氨酸及亮氨酸。当柱流出液中出现缬氨酸时，再串入第4根柱，继续用0.2mol/L氯化铵洗脱到第3柱出现纯亮氯酸时，拆开第3柱。

    第3根柱改用0.1mol/L氨-氯化铵，以400ml/min（8.8cm/h)流速洗脱亮氨酸，收集、浓缩结晶。

    第4根柱继续用0.2mol/L氯化铵，以300ml/min(15cm/h)流速洗脱缬氨酸，分部收集，鉴定，浓缩结晶。   

    浓缩和精制  L-缬氨酸：将洗脱液减压浓缩成粗品，在酸性条件下纯化，中和，赶氨，脱色至无色透明，再浓缩结晶，抽滤，醇洗，烘干，得L-缬氨酸精品。L-亮氨酸：洗脱液浓缩成粗品，加蒸馏水加热溶解，加活性炭脱色至无色透明，再浓缩结晶，抽滤，醇洗，烘干，得L-亮氨酸精品。L-组氨酸盐酸盐：将洗脱液浓缩至产生结晶时，趁热用盐酸调pH2.5，迅即加入2倍于溶液量的乙醇，静置沉淀，过滤得粗品。按粗品6份加蒸馏水10份加热溶解，用盐酸调pH2.5，加碳脱色，滤液加乙醇存放结晶，过滤，醇洗，烘干，得L-赖氨酸盐酸盐：洗脱液浓缩成糖浆状，加盐酸调pH3.8～4.1，加4～5倍量75%乙醇，放置，冷却结晶，得赖氨酸粗品。将粗品加水溶解，用少量乙醇洗浓缩器，合并，静置，结晶。将结晶打碎抽滤至干，倒出结晶加70%乙醇搅成糊状，抽滤去乙醇溶液，用70%乙醇洗一次，再用95%乙醇洗一次，抽干，烘干，得L-精氨酸盐酸精品。

    以上制得L-缬氨酸4.5kg(得率14.7%)，L-亮氨酸12kg(得率25%)，L-组氨酸盐酸盐5kg(得率19.6%)，L-精氨酸盐6kg以上（得率37.5%).

从猪血粉水解液制备L-组氨酸及亮氨酸

操作过程：

    水解  取猪血粉1.7kg，工业盐酸5l和蒸馏水2l混合，油浴回流24h，加水稀释至12l，加活性碳100g，80℃保温30min，室温放置12h，过滤，滤液减压赶酸3次，每次加蒸馏水5l，最后加水稀释成12l，调pH3～4，加活性碳200g，80℃保温2h，冷却至室温，1～4℃放置2天，过滤去酪氨酸。滤液用6mon/L盐酸调pH至2.5，即得上柱液。

    上柱  上柱液通过φ7×80cm 732阳离子交换树脂柱，5根串联，流速为(r×10)ml/min(r为树脂柱半径），上柱完毕，用蒸馏水洗涤至pH5～6，用0.05mol/L氨水洗脱，开始收集流出液体至pH6.8为止，为含亮氨酸收集液，pH6.8～9.5为组氨酸收集液。同时改用0.1mol/L氨水洗脱至pH11为赖氨酸收集液。再用2mol/L氨水洗脱至茚三酮反应消失为止，为精氨酸收集液。树脂用2mol/L氨水浸泡再生。

蚕蛹水解液中系统分离制备多种氨基酸

操作过程：

    原料处理  聚缫丝厂下脚料蚕蛹，经压榨去油并粉碎后相继用汽油浸泡1～2日，回收汽油，得脱脂蚕蛹粉。

    水解  脱脂蚕蛹粉3kg加6mol/L盐酸15l，搅匀，膨胀后，置搪玻璃罐中徐徐升温至110℃，保温水解24～26h。

    减压脱酸  待水解液降温至60℃以下，过滤，滤液减压脱羧至原体积三分之一，滤渣用5倍于滤液的水洗涤，滤液与洗液合并，加水稀释至100l(pH约为1.5～2.0)。

    脱色  按上液的总量加1～2%活性碳。于90℃保温搅拌2h，降至4～10℃静置1～2日，使酪氨酸吸附和沉淀安全，抽滤，得淡橙黄色透明液体。

  732树脂阳柱纯化、粗分  ①上述脱酸脱色液以130ml/min(44,2cm)流速上1号732阳柱 （φ150×1500mm，内装732阳树脂20l)至饱和。②串联2事情732阳柱（φ100×1400mm，内装732阳树脂10l)，继续上样至饱和。用50～60l蒸馏水冲柱至中性，流速150ml/min(114.6cm/h)。穿漏液并入下次上柱液。③拆开2柱，分别再串1根732阳柱  （φ100×1400mm，内装732阳树脂10l)。分别用0.1mol/L氨水洗脱，流速90ml/min(68.9cm/h)。洗脱液次用2l容器收集至pH约为11。④洗脱液逐瓶依次纸层析定性。展开剂为酚：水（3:1)。分别合并酸性氨基酸、中性氨基酸及赖氨酸等组分。

    中性氨基酸进一步分组  ①732阳柱分得的中性氨基酸组分，加0.5%碳脱色至无色澄清后，用稀氢氧化钠缓缓调pH8～8.5，以90ml/min(68.9cm/h)流速上1号717阴柱（φ100×1400mm，内装717阳树脂10l)至饱和。②串联2事情717阴柱（φ100×1000mm，内装717阳树脂61l)，用20～30l蒸馏水冲柱至pH约8，流速110ml/min(84cm/h)。③用0.1mol/L盐酸以70ml/min(53.5/h)流速洗脱。用500ml容器收集洗脱液18瓶左右。④串联3号717阴柱，依法洗脱和收集500ml×27瓶左右。流速49ml/min(214.9cm/h)。⑤弃1号柱，串联4号717阴柱（φ40×1300mm，内装717阳树脂1.3l)，依法洗脱和收集至完。⑥逐瓶依次纸层析定性分组，展开剂为正丁醇：冰醋酸：无水乙醇：水=4:1:1:2。分别合并Gly、Ala为主和Leu、Val为主的组分。

    酸性氨基酸的分离  ①酸性氨基酸组分用稀氢氧化钠缓缓调pH5～6，以45ml/min（214.9cm/h)流速上第1根717阴柱（φ40×1400mm，内装717阳树脂1.4l)至饱和。②串联第2根717阴柱（φ40×1300mm，内装717阳树脂1.3l)，继续上样至饱和。流速同前。③串联第3根717阴柱（φ40×1200mm，内装717阳树脂1.2l），依法上样至完，必要时还可串联1～2根717阴柱。④用蒸馏水4～6l冲柱至pH约8，流速50ml/min(239.9cm/h)。⑤拆开各柱，分别串联1根717阴柱（φ40×1000mm，内装717阳树脂1.0l）。分别用0.1mol/L盐酸洗脱，流速35ml/min。分别用500ml容器依次收集洗脱液9瓶左右。然后分别再串1根717阴柱（规格同前）。依法洗脱和收集至茚三酮反应微略止。⑥逐渐依次纸层析定性，展开剂为酚:水（3:1)。合并与标准Asp和Glu的Rf值相同组分。

    717阴柱分离甘氨酸和丙氨酸  以Gly及Ala为主组的分用稀氢氧化钠液缓缓调pH8左右，按照分离Asp和Glu的方法上样和洗脱。采用正丁醇：冰醋酸：无水乙醇：水（4:1:1:2)系统纸层析定性，分别合并与标准Gly及Ala的Rf值相同组分。

    732阳柱分离亮氨酸和缬氨酸  ①以Leu和Val为主的组分，用6mol/L盐酸调pH3.5～4.0，以40ml/min流速按照分离Asp和Glu的方法上饱3根732阳柱。②用0.1mol/L氯化铵作洗脱剂，仍按分离Asp和Glu的方法洗脱和收集洗脱液。待缬氨酸洗脱完后，改用0.1mol/L氨-氨化铵脱亮氨酸。③采用正丁醇：冰醋酸：无水乙醇：水（4:1:1:2)系统纸层析定性，分别合并与标准Leu及Val的Rf值相同组分。

    各种氨基酸的精制  ①L-天门冬氨酸和L-谷氨酸，纯天门冬